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      水質(糞)大腸菌群快速檢驗紙片

       

       

       

      編號

      產品名稱

      規格

      單價

      適用范圍

      BD105Ⅰ 水質(糞)大腸菌群快速檢驗紙片 1份/包 30元/包 適用于湖水、水源水中大腸菌群的快速檢測。
      BD105Ⅱ 水質(糞)大腸菌群快速檢驗紙片 1份/包 30元/包 適用于河水、生活用水、醫療機構處理后排污水、禽畜養殖業等排放廢水中大腸菌群的快速檢測。

       分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ兩個型號,請注意選擇型號。

      1、適用范圍 水質(糞)大腸菌群的測定紙片快速法

      本標準規定了總大腸菌群、糞大腸菌群的快速測定方法。

      本標準適用于地表水、生活污水、醫療機構及禽畜養殖業等其他行業排放的廢水中(糞)大腸菌群的快速篩查。

      本方法的檢出限為20MPN/L。

      2、    2、規范性引用文件

      本標準內容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件,其有效版本適用于本標準。HJ/T91地表水和污水監測技術規范

      3、     3、術語和定義

      下列術語和定義適用于本標準。

      3.1總大腸菌群(total coliforms)

      在37℃培養,24h內能發酵乳糖酸產氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。

      3.2          糞大腸菌群(fecal coliforms)

      44.5℃培養,24h內能發酵乳糖產酸氣的總大腸菌群,屬糞行來源,稱為糞大腸菌群。

      4、方法原理

      將一定量的乳糖、指示劑(溴甲酚紫和2,3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC)以及營養成分等吸附于一定面積的無菌濾紙上,當細菌生長繁殖時,產酸使PH值降低,溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色。同時,產氣過程相應的脫氫酶在適宜的PH范圍內,催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臜(TTF),即可在產酸后的黃色背景下顯示出紅色斑點(或紅暈)。通過上述指示劑的顏色變化就可對是否產酸產氣作出判斷,從而確定是否有(糞)大腸菌群存在,再通過查MPN表就可得出相應(糞)大腸菌群的濃度值。

      5、試劑和材料

      除非另有說明,分析時均使用符合國家標準的分析純化學試劑。

      5.1市售水質總大腸菌群、糞大腸菌群測試片:10ml水樣量紙片按附錄A的方法進行質量鑒定,達到要求后方可使用。

      5.2無菌水

      用新制備的去離子水或蒸餾水,按無菌操作要求,121℃高壓蒸汽滅菌20min,備用。

      5.3硫代硫酸鈉溶液:ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml

      稱取硫代硫酸鈉10g,溶于適量蒸餾水(或去離子)中,稀釋至100ml,現配。

      5.4乙二胺四乙酸二鈉(EDTA- Na2)溶液:ρ(C10H14N2O8Na2。 2H2O)=0.15g/ml

      稱取EDTA-Na2 15g,溶于適量蒸餾水(或去離子水)中,稀釋至100ml,此溶液保質期為30d。

      6         6、 儀器和設備

      6.1     恒溫培養箱:37℃±1℃。

      6.2     恒溫培養箱:44℃±0.5℃。

      6.3     高壓蒸汽滅菌器:121℃、101.3kpa。

      6.4     冰箱:0-4℃

      6.5     移液管:1±0.01ml、10±0.1ml。

      6.6     試管:φ15mm×150mm.

      6.7     采樣瓶:500ml。

      注1:移液器、試管、采樣瓶等玻璃器皿實驗前要按無菌操作要求包扎,121℃高壓蒸汽滅菌20min,烘干,備用。

       

      6          7、樣品

      用滅菌器具,按照HJ/T 91的規定及無菌操作的要求,采集水樣400ml放入已滅菌的采樣瓶中。如果是經加氯處理的廢水,需在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉(EDTA- Na2)溶液(5.41.2ml,以消除干擾。酸性樣品,需調節胖胖的PH值至7.0-8.0。

      采樣后2h內檢測,否則,需10℃以下冷藏并6h內送檢,實驗室接樣后,應將樣品放入0-4℃冰箱并2h內測定。

      2:10mg硫代硫酸鈉可保證去除水樣中1.5mg余氯,硫代硫酸鈉用量克根據水樣實際余氯量調整。

       

      7          8、分析步驟

      8.1接種量

      每個樣品按三個不同的接種量接種,每個接種量分別接種5張紙片,共接種15張紙片。

      根據水樣的污染程度確定接種量,應盡可能使5個接種量最大的紙片為陽性、5個接種量最小的紙片為陰性。

      清潔水樣的參考接種量分別為10 ml、1 ml、0.1 ml,受污染水樣參考接種量根據污染程度可接種1 ml、0.1ml、0.01 ml0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等,見下表1。

      1水樣接種量參考表

      接種量小于1ml時,水樣應制成稀釋樣品后使用。接種量為0.1ml、0.01 ml時,分別制成1:10稀釋樣品、1:100稀釋樣品。其它接種量的稀釋樣品依次類推。

      1:10稀釋樣品的制作方法為:吸取1ml水樣,注入盛有9 ml無菌水的試管中,混勻,制成1:10稀釋樣品。其它稀釋度的稀釋樣品同法制作。

       

      8.2接種、培養

      水樣充分混勻,按無菌操作制作稀釋水樣及接種水樣。

      清潔水樣,接種水樣總量為55.5ml,10 ml水樣量紙片5張,每張接種水樣10ml,1 ml水樣量紙片10張,其中5張各接種水樣1ml,另5張各接種1:10的稀釋水樣1ml。受污染水樣,接種3個不同稀釋度的1ml稀釋水樣各5張。

      接種水樣應均勻涂布于紙片上,紙片充分侵潤、吸收水樣,用手輕輕壓平,做好標記。

      測總大腸菌群時,在37±1℃的條件下培養18-24h后觀察結果;測糞大腸菌群時,在44.5±0.5℃的條件下培養18-24h后觀察結果。

      31、檢測糞大腸菌群時,紙片接種后應立即放置于44.5±0.5℃的恒溫培養箱中培養,在常溫下放置過久將影響檢測結果的準確性。

           2、紙片加入水樣后,短時間內變黃或退色,表明水樣存在酸性物質活氧化劑干擾,需按“7樣品”一節方法去除相應干擾。

       

      8.3結果判定

      1)紙片上出現紅斑或紅暈且周圍變黃,為陽性。

      2)紙片全片變黃,無紅斑或紅暈,為陽性。

      3)紙片部分變黃,無紅斑或紅暈,為陰性。

      4)紙片的紫色背景上出現紅斑或紅暈,而周圍不變黃,為陰性。

      5)紙片無變化,為陰性。

        結果判斷參照圖片見附錄B。

      6          9、結果計算與表示

      6.1     9.1結果計算

         根據不同接種量的陽性紙片數量,查MPN表(附錄C),經下面的公司換算報告1L水中(糞)大腸菌群數:

      6.2     9.2結果表示

         測定結果保留二位有效數字,大于100時以科學計數法表示,結果的單位為MPN/L。平均值以幾何平均計算。

      7         10、 精密度和準確度

      微生物檢測書記為偏態分布,按其統計分析要求,其檢測所得MPN值全部經對數(以10為底)轉換后進行以下分析。

      10.1精密度

      6家實驗室分別對有證標準樣品(15600MPN/L)、低濃度(4.0×10MPN/L)、中濃度(1.0×10MPN/L)、高濃度(8.0×104MPN/L)實際樣品的總大腸菌群進行了測定,實驗室內相對標準偏差范圍分別為:4.5%7.5%、3.5%12.4%、4.5%6.9%、2.8%5.8%;實驗室間的相對標準偏差范圍分別為:3.3%、12.6%、4.6%、1.6%;重復限為0.61、0.67、0.67、0.64;再現性限為1.09、0.81、0.66、0.69。

      6家實驗室分別對有證標準樣品(12100MPN/L)、低濃度(1.0×10MPN/L)、中濃度(4.0×10MPN/L)、高濃度(5.0×10MPN/L)實際樣品的糞大腸菌群進行了測定,實驗室內的相對標準偏差范圍分別為:4.5%11.3%、11.4%31.3%、2.8%21.5%、3.9%13.2%;實驗室間的相對標準偏差分別為5.2%、14.8%、11.9%、8.2%。重復性限為0.93、0.83、0.85、0.77;再現性限為1.28、1.44、1.35、0.89。

      10.2           10.2準確性

      6家實驗室對總大腸菌群有證標準樣品(15600MPN/L)進行測定,實驗室內相對誤差的范圍是-5.5%~-12.8%,相當誤差的最終值為-8.8%±6.0%。

      6家實驗室對糞大腸菌群有證標準樣品(12100MPN/L)進行測定,實驗室內相對誤差的范圍是-3.8%~-16.0%,相對誤差的最終值為-10.3%±9.2%。

      11              11、 質量保證和質量控制

      11.1應使用質量鑒定合格的紙片。

      11.2每批樣品應用無菌水做全程序空白測定,培養后的紙片上不的有任何微生物生長,否則,該次樣品測定結果無效,應查明原因后重新測定。

      11.3每批樣品應使用有證標準菌株進行陽性、陰性對照試驗?偞竽c菌群測定的陽性菌株為大腸埃希氏菌,陰性菌株為金黃色葡萄菌;糞大腸菌群測定的陽性菌株為大腸埃希氏菌,陰性菌株為產氣腸桿菌。

      上述標準菌株均制成濃度為300~3000/ml的菌懸液,分別取相應水量的菌懸液接種紙片,按“8.2接種、培養”一節的要求培養,大腸埃希氏菌應呈現陽性反應;金黃色葡萄球菌、產氣腸桿菌應呈現陰性反應,否則,該次樣品測定結果無效,應查明原因后重新測定。

      12                 12、廢棄處理

      使用后的器皿及廢棄物須用121℃高壓蒸汽滅菌20min后,器皿方可清洗,廢棄物作為普通垃圾處理。

       

       

       

       

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